e-ISSN 1828-1427
Rivista trimestrale di Sanità Pubblica Veterinaria edita dall'Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell'Abruzzo e del Molise ‘G. Caporale’
A quarterly journal devoted to veterinary public health, veterinary science and medicine published by the Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell’Abruzzo e del Molise ‘G. Caporale’ in Teramo, Italy
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ISSUES ONLINE
| 2016 - Volume 52 (3-4), July-December | |||
| Short communication Prachi Sharma, David E. Stallknecht, Elizabeth W. Howerth |
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| Epizootic haemorrhagic disease virus induced apoptosis in bovine carotid artery endothelium is p53 independent | 363-368 | ||
| doi: 10.12834/VetIt.548.2604.2 |
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Summary Epizootic haemorrhagic disease virus (EHDV) replicates in endothelium and it has been shown that EHDV serotype 2 (Ibaraki) is able to cause cell death by apoptosis in cow pulmonary artery endothelial cells. However, the underlying mechanism has not been established. For some viruses, such as influenza, a p53 dependent mechanism has been demonstrated in viral induced apoptosis. In this study, we investigate the involvement of p53 in the induction of apoptosis in a US isolate of EHDV serotype 2 in cow endothelium. We inoculated cow carotid artery endothelial cell cultures with live and inactivated EHDV‑2 isolated from a white‑tailed deer (Odocoileus virginianus). Using in situ nick end‑labeling (TUNEL), caspase‑3 (cleaved) immunohistochemistry (IHC), flow cytometry and annexin staining we documented the development of apoptosis and its direct relation to viral replication. p53 gene regulation and protein expression were assessed by reverse transcription polymerase chain reaction and IHC, respectively, in infected cells. We show that p53 mRNA was not upregulated and protein expression was not significantly increased. No increase of p53 mRNA or protein expression was observed in cells that stained positive for EHDV antigen. Our results indicate that EHDV induces apoptosis through a p53 independent mechanism. Keywords |
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| L'apoptosi indotta dal virus della Malattia emorragica epizootica nelle cellule endoteliali dell'arteria carotidea nei bovini è indipendente dalla proteina p53 | |||
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Riassunto Il virus della Malattia emorragica epizootica (EHDV) si replica nell'endotelio vascolare. Si è visto come il sierotipo 2 dell'EHDV, ceppo Ibaraki, è in grado di causare la morte delle cellule endoteliali delle arterie polmonari di bovino per aptosi. Il meccanismo che sta alla base del fenomeno non è stato del tutto chiarito. Per alcuni virus (ad es. influenza) l'apoptosi è p53 dipendente. Oggetto dello studio è stato il coinvolgimento della proteina p53 nell'induzione dell'apoptosi da parte del sierotipo 2 dell'EHDV nell'endotelio bovino. Pertanto, colture di cellule endoteliali dell'arteria carotidea di bovino sono state inoculate con il ceppo vivo e inattivato del sierotipo 2 dell'EHDV isolato da un cervo della Virginia (Odocoileus virginianus). Mediante utilizzo del saggio TUNEL (in situ nick end‑labeling), dell'immunoistochimica per la caspasi‑3 (IHC), della citofluorimetria e della colorazione dell'annessina, è stato possibile documentare il processo apoptotico e la sua relazione diretta con la replicazione virale. Nelle cellule infette, la regolazione del gene p53 e la sua espressione proteica sono state testate mediante reazione a catena della polimerasi trascrittasi inversa (RT‑PCR) e IHC. L'indagine non ha rilevato aumenti significativi dei livelli di RNA messaggero (mRNA) della p53 né della sua espressione proteica neanche nelle cellule positive alla colorazione per l'antigene EHDV. I risultati ottenuti indicano che EHDV induce apoptosi attraverso un meccanismo che non è dipendente dalla proteina p53. Parole chiave |
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