e-ISSN 1828-1427
Rivista trimestrale di Sanità Pubblica Veterinaria edita dall'Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell'Abruzzo e del Molise ‘G. Caporale’
A quarterly journal devoted to veterinary public health, veterinary science and medicine published by the Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell’Abruzzo e del Molise ‘G. Caporale’ in Teramo, Italy
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ISSUES ONLINE
| 2019 - Volume 55 (4), October-December | |||
| Corinne Sailleau, Emmanuel Breard, Cyril Viarouge, Guillaume Belbis, Thomas Lilin, Damien Vitour, Stephan Zientara | |||
Experimental infection of calves with seven serotypes of Epizootic Hemorrhagic Disease virus: production and characterization of reference sera |
339-346 | ||
| doi: 10.12834/VetIt.2104.11179.1 |
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| Summary The aim of this study was to produce reference sera against the seven serotypes of Epizootic hemorrhagic disease virus (EHDV‑1, EHDV‑2, EHDV‑4, EHDV‑5, EHDV‑6, EHDV‑7, and EHDV‑8). In a high containment unit, seven Prim ‘Holstein calves were inoculated at day 0 (D0) with the selected strains (1 EHDV serotype per calf). Blood samples (EDTA and whole blood) were periodically taken from D0 until the end of the experiment (D31). Sera were tested with two commercially available EHDV competitive ELISAs (c‑ELISA). Viral genome was detected from EDTA blood samples using in‑house real‑time RT‑PCR. Sera taken on D31 post infection (pi) were tested and characterized by serum neutralization test (SNT) and virus neutralization test (VNT) (for calibration of reference sera). Viral RNA was first detected at D2 pi in five calves. All infected animals were RT-PCR positive at D7 pi. Seroconversion was observed between D10 and D23 pi depending on the EHDV serotype. SNT and VNT have allowed to determine the neutralizing antibody titers of each serum and the potential cross‑reactions between serotypes. The two c‑ELISA used in this study showed similar results. The calibrated sera are now available for the serological identification of an EHDV isolated on tissue culture or to be used as positive control in seroneutralization assay. Keywords |
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| Infezione sperimentale di vitelli con sette sierotipi del virus della malattia emorragica epizootica: produzione e caratterizzazione di sieri di riferimento | |||
| Riassunto Scopo di questo studio è stato produrre sieri di riferimento contro i sette sierotipi del virus della malattia emorragica epizootica (EHDV‑1, EHDV‑2, EHDV‑4, EHDV‑5, EHDV‑6, EHDV‑7 e EHDV‑8). In una struttura BSL-3 sono stati inoculati sette vitelli Prim' Holstein con i ceppi di EHDV selezionati (1 sierotipo per vitello). Campioni di sangue (EDTA e sangue intero) sono stati prelevati periodicamente il giorno dell'inoculo (D0) fino alla fine dell'esperimento (D31). I sieri sono stati testati con due kit ELISA (c‑ELISA). Il genoma virale è stato rilevato da campioni di sangue EDTA mediante una in‑house real‑time RT‑PCR. Per calibrare i sieri di riferimento, i sieri prelevati al D31 sono stati testati e caratterizzati sia con il test di sieroneutralizzazione (SNT) che con il test di virusneutralizzazione (VNT). Due giorni dopo l'inoculo 5 animali sono risultati positivi alla RT-PCR specifica per EHDV. A sette giorni tutti gli animali erano positivi. Tutti gli animali hanno sieroconvertito a seconda del sierotipo tra D10 e D23, in base al sierotipo EHDV, tra D10 e D23. I saggi di siero- e virusneutralizzazione hanno permesso di determinare i titoli anticorpali neutralizzanti di ciascun siero e le potenziali reazioni crociate tra sierotipi. I due kit c‑ELISA utilizzati in questo studio hanno mostrato risultati simili. Gli antisieri così prodotti e calibrati sono disponibili e possono essere utilizzati per identificare ceppi di EHDV isolati in tessuto colture o come controlli positivi nel test di sieroneutralizzazione. Parole chiave |
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