e-ISSN 1828-1427
Rivista trimestrale di Sanità Pubblica Veterinaria edita dall'Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell'Abruzzo e del Molise ‘G. Caporale’
A quarterly journal devoted to veterinary public health, veterinary science and medicine published by the Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell’Abruzzo e del Molise ‘G. Caporale’ in Teramo, Italy
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ISSUES ONLINE
| 2017 - Volume 53 (3), July-September | |||
| Mirella Luciani, Gisella Armillotta, Laura Manna, Antonella Ciarelli, Tiziana Di Febo, Ivanka Krasteva, Attilio Pini, Flavio Sacchini & Anna Rita D'Angelo | |||
| Selection of a monoclonal antibody by ELISA, immunoblotting and Quartz Crystal Microbalance technology for immunohistochemical detection of Mycoplasma mycoides subsp. mycoides | 215-223 | ||
| doi: 10.12834/VetIt.435.2084.2 First published on line: 15.07.2016 |
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Summary An immunohistochemical (IHC) technique was optimised using a monoclonal antibody (MAb) to detect Mycoplasma mycoides subsp. mycoides (Mmm), the agent of Contagious Bovine Pleuropneumonia (CBPP), in sections of lung tissue. A panel of MAbs was produced and screened for Mmm specificity and for cross-reactivity against other mycoplasmas belonging and not belonging to the Mycoplasma mycoides cluster, using in parallel indirect ELISA (i-ELISA) and Immunoblotting (IB). Based on i-ELISA and IB characterization data, 1 MAb (clone 3G10E7) was selected and its highest affinity vs Mmm was confirmed by the Quartz Crystal Microbalance (QCM) technology. Afterwards, IHC analyses were conducted to compare MAb 3G10E7 vs rabbit Mmm specific hyperimmune serum using lung tissue sections of CBPP infected and CBPP negative animals. Results suggest that screening of MAbs using in parallel ELISA, IB, and QCM technology enables to select high affinity target specific MAbs. Immunohistochemical results demonstrated that MAb 3G10E7 improved IHC performances, showing reduced background staining and no cross-reactivity against Mycoplasma bovis, which is responsible of pneumonia in cattle. Keywords |
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| Selezione mediante ELISA, immunoblotting e microbilancia a cristalli di quarzo di un anticorpo monoclonale e suo utilizzo in immunoistochimica per la ricerca di Mycoplasma mycoides subsp. mycoides | |||
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Riassunto In questo lavoro è stata ottimizzata una metodica immunoistochimica (IIC) per la ricerca, in sezioni di tessuto polmonare, di Mycoplasma mycoides subsp. mycoides (Mmm), l'agente della pleuropolmonite contagiosa bovina (PPCB), utilizzando un anticorpo monoclonale (MAb). Un pannello di MAbs è stato prodotto e caratterizzato; la specificità dei MAbs verso Mmm e la cross‑reattività verso altri micoplasmi appartenenti e non appartenenti al Mycoplasma mycoides cluster sono state testate utilizzando in parallelo l'ELISA indiretta (i-ELISA) e l'immunoblotting (IB). Dai risultati ottenuti in i-ELISA e IB, un MAb (clone 3G10E7) è stato selezionato e l'elevata affinità verso Mmm è stata confermata mediante la tecnica della microbilancia a cristalli di quarzo (MCQ). Successivamente, sono state effettuate analisi immunoistochimiche per comparare il MAb 3G10E7 e un siero iperimmune di coniglio specifico per Mmm utilizzando sezioni di tessuto polmonare di animali positivi per PPCB e di animali negativi. I risultati ottenuti suggeriscono che lo screening dei MAbs, effettuato utilizzando in parallelo l'ELISA, l'immunoblotting e la tecnologia MCQ, permette di selezionare un MAbs con alta affinità e specificità per l'antigene di interesse. I risultati dell'immunoistochimica hanno dimostrato che il MAb 3G10E7 migliora le prestazioni del metodo IIC, fornisce segnali di fondo più bassi e non presenta cross-reazioni verso Mycoplasma bovis, responsabile di polmonite nei bovini. Parole chiave |
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