e-ISSN 1828-1427
Rivista trimestrale di Sanità Pubblica Veterinaria edita dall'Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell'Abruzzo e del Molise ‘G. Caporale’
A quarterly journal devoted to veterinary public health, veterinary science and medicine published by the Istituto Zooprofilattico Sperimentale dell’Abruzzo e del Molise ‘G. Caporale’ in Teramo, Italy
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ISSUES ONLINE
| 2013 - Volume 49 (2), Aprile-Giugno | |||
| Irshad Ahmed Hajam, Pervaiz Ahmed Dar, Shanmugam Chandra Sekar, Rajakishore Nanda, Subodh Kishore, Veerakyathappa Bhanuprakash, Kondabattula Ganesh | |||
| Espressione, purificazione e caratteristiche funzionali della Flagellina, un TLR5-legante |
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Riassunto La flagellina, legante il Toll-like receptor 5 (TLR5), è nota per le sue proprietà adiuvanti e per l'induzione di citochine pro-infiammatorie e immunità innata. L'articolo descrive i risultati della clonazione del gene fliC di Salmonella Typhimurium effettuata in un plasmide con espressione pET‑32a, utilizzando primer specifici per il gene messi a punto nel Foot and Mouth Disease Vaccine Quality Control and Assurance Laboratory. La struttura e l'orientamento del gene fliC sono stati confermati tramite colony PCR e analisi con enzimi di restrizione e sequenziamento. L'analisi della sequenza di fliC ha evidenziato il corretto orientamento del gene e la presenza di 1.485 nucleotidi. Il plasmide pET-fliC è stato impiegato per la trasformazione genetica in cellule di Escherichia coli BL21 (DE3) e il gene è stato espresso tramite induzione con IPTG. La massa del poly His-tag-fliC pari a circa 70 kDa è stata confermata con elettroforesi su gel di poliacrilammide in presenza di sodio dodecil solfato (SDS-PAGE). L'identità/autenticità del fliC ricombinante è stata confermata dalla reattività specifica evidenziata con MAb anti-fliC di S. Typhimurium. Le proprietà antigeniche e funzionali del fliC ricombinante sono state determinate tramite l'induzione di anticorpi antigene-specifici nelle cavie e l'aumento in vitro dell'espressione dell'm-RNA di alcuni mediatori come TNF-α e GM-CSF. Parole chiave |
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