Riassunto
In questo studio, è descritta una metodica di real-time PCR per valutare la qualità di un vaccino attenuato del virus ORF (ORFV), agente eziologico dell’ectima contagioso. Il protocollo descritto prevede una sonda specifica per il gene altamente conservato codificante per la DNA polimerasi virale. Monostrati confluenti di cellule primarie testicolari di agnello sono stati infettati con diversi lotti e diluizioni di vaccino attenuato. Il surnatante, raccolto a vari intervalli, è stato sottoposto ad estrazione e quantificazione del DNA tramite real-time PCR. È stato quindi possibile determinare come 42 ore post infezione rappresenti il momento ottimale per la raccolta del virus vaccinale dai monostrati infetti. È stata riscontrata una correlazione pari a 0.8169 tra i titoli ottenuti in real-time PCR e quelli ottenuti tramite titolazione convenzionale. In conclusione, questo metodo fornisce una valida alternativa a supporto delle metodiche classiche per quantificare le particelle virali infettanti di un vaccino ORF vivo attenuato.

Parole chiave
Ectima contagioso, DNA polymerase gene, India, ORF, PCR, Polymerase chain reaction, Potenza, Real-time PCR, TaqMan, Vaccino, Virus.